THP-1培养细节你都了解吗？

细胞简介 该细胞是从一名1岁的患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立。该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞，细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白，表达C3R和FcR；可受佛波酯TPA诱导向单核系方向分化；可作为转染宿主。 细胞信息 细胞名称：Thp-1人单核细胞白血病 生长特性：悬浮、低密度容易聚团，高密度分散 倍增时间：60-70 小时 （PubMed= 6970727 ）; 26 小时 （PubMed= 25984343 ）; ~35-50 小时 （DSMZ=ACC-16） 换液频次：2~3次/周 传代比例：1:2-1:4（具体情况视实际细胞量决定）细胞密度在8X106/ml 进行传代，不要超过1X106/ml 培养基推荐配方 ：RPMI-1640（中乔新舟 货号：ZQ-200）+10%胎牛血清（中乔新舟 货号：ZQ0500）+1%双抗（中乔新舟  货号：CSP006）+β-Mer 终浓度：0.05mM（中乔新舟 货号：CSP005，例：500ml添加500ul） β-Mer（巯基乙醇）的作用：β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化的作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时，可适当增加巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍）。 [图片] THP-1细胞的传代 THP-1细胞为悬浮细胞且具有低密度依赖性，当细胞密度达到8×105个活细胞/ mL时需要进行传代。细胞密度不要超过1×106活细胞/ mL。 比例一般为1:2-4，可以分瓶后补充培养液，不需要离心，t25培养瓶分瓶后补充新鲜完全培养基到7ml， 如果对悬浮细胞密度把控不好，最佳的方式是进行细胞计数。 培养一周左右可以离心一次，以去除一些死细胞。 THP-1复苏不起来怎么办？ 3.1 该细胞冻存后复苏率较低，冻存时请酌情提高细胞量，冻存时活细胞密度不能低于100万-300万/mL，同时复苏密度也有依赖性，细胞复苏后需要培养3-5天状态才能恢复，如有细胞碎片，待细胞密度增大后通过低速离心去除。 3.2该细胞为悬浮细胞，在培养时更喜欢温和处理，细胞密度低时，培养时尽量少对细胞进行离心处理以此造成对细胞的伤害。换液时不要全培养基更换。 3.3 THP-1细胞中需要添加β-巯基乙醇，现用现配，不可直接添加至完培中长期储存，会影响β-巯基乙醇的稳定性。