中乔新舟原代细胞永生化常用途径！

在体外建立永生细胞以研究细胞生长、分化和衰老是很重要的。本文简单介绍中乔新舟从原代培养到建立永生细胞系的方法。 三个方案可供选择： 方案一：SV40 LargeT 介导的永生化细胞 许多病毒基因是可以影响细胞周期的，目前常用的方法是使用SV40 T抗原来诱导永生化。SV40 T抗原已被大量细胞验证是细胞永生化最简单有效的试剂，其机制相对容易理解。SV40（simian virus 40）是猿猴肾细胞病毒，SV40编码两种肿瘤抗原 (tumor antigen，T抗原)，分别为大T抗原和小T抗原。 T抗原的作用是： ①大T抗原为细胞转化的启动所必需; ②转化细胞表型的维持必需要有大T抗原的连续表达; ③小T抗原对于细胞的转化不是必需的，但可起加强作用。 因此，SV40 Large T 能使细胞进入永生化的增殖状态，缺点是存在潜在的致癌风险，可能引起细胞恶性转化。 (如中乔新舟：货号：ZQ1099 名称是huvec-Immortalized人脐静脉内皮细胞-永生化的细胞等)。下图是CV40基因组DNA的构成元件和永生化的进程： 方案二：hTERT介导的永生化细胞 端粒中含有一种逆转录酶（TERT），它能催化作为模板的端粒酶反转录为端粒DNA，继而合成到染色体末端，不断弥补端粒的长度，使细胞持续生长。然而，正常细胞中通常不表达TERT。为了实现细胞永生化，需要使用转基因技术构建表达载体，将TERT转染到细胞中。 hTERT是人端粒酶蛋白部分的催化亚基编码基因，与端粒酶活性呈现正相关。为了使原代细胞获得永生化同时维持正常细胞的生理特性，我们将原代细胞转染人端粒酶逆转录酶cDNA（hTERT），从而激活端粒酶活性，维持端粒长度，阻止染色体端粒降解，诱导细胞永生化。在高传代数和使用致癌基因时，hTERT永生化细胞忠实地代表了体内正常细胞的生理特性。 方案三：复合型病毒感染介导的永生化细胞 在某些细胞类型中，仅使用一种永生化方法可能无法产生永生细胞，或者有些细胞不适合端粒酶介导的方法，因此，根据不同的细胞系，最好结合抑制细胞周期和hTERT的表达来永生更多的细胞。这就需要用到复合型病毒感染，通过慢病毒转染的方式携带SV40T及hTERT基因，这种方法综合了上述两种方法的优缺点，可能既保持了原始特性，也避免核型发生变异。如：ZQY008人胰腺星状细胞-永生化；ZQY009 人肝内胆管上皮细胞-永生化等细胞。