DNA水解酶为一类可以将组成DNA分子的脱氧核糖核苷酸之间的连接(磷酸二酯键)打开的酶。 具体包括:DNA聚合酶α/引发酶(引发及后随链的部分合成)，DNA聚合酶δ(DNA复制主要酶)，增殖细胞核抗原(滑动夹子，与合成连接性有关)，拓扑异构酶(母链DNA拓扑异构化)，解(螺)旋酶(能解开DNA双螺旋)，单链DNA结合蛋白及复制蛋白(单链DNA结合作用)，复制因子C(参与滑动夹子的装配)，DNA连接酶(连接冈崎片段及参与修复)，核酸酶(去除RNA引物)，侧翼核酸内切酶(去除RNA引物)。 总体作用是在DNA复制过程中发挥的，在DNA复制过程中起到关键性的作用。