1、免疫动物

免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程；

2、细胞融合

采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞；

3、选择性培养

选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基；

4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化

采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增；

5、单克隆抗体的大量制备

单克隆抗体的大量制备一般采用动物体内诱生法和体外培养法。