一般速溶咖啡的咖啡因含量是在1.9-3.5%之间。按1杯1.8克纯咖啡加150毫升水算，一杯速溶咖啡(大约150毫升)中的咖啡因含量一般约为3%，即约54毫克。含咖啡因约多对身体越不好，很容易上瘾。

习惯大量饮用咖啡的人停止饮用咖啡，会出现头痛、易怒、肌肉紧绷和神经过敏等症状，而摄入咖啡因才症状消失。怀孕及哺乳期间的妇女饮用咖啡应适量，因为咖啡因会渗透至胎盘，而且会出现在母乳里。喝咖啡会引起人的精神兴奋，在喝完咖啡的4小时内，咖啡因会影响睡眠。

咖啡因是一种植物生物碱，在许多植物中都能够被发现。作为自然杀虫剂，它能使吞食含咖啡因植物的昆虫麻痹。人类最常使用的含咖啡因的植物包括咖啡、茶及一些可可。

其他不经常使用的包括一般被用来制茶或能量饮料的巴拉圭冬青和瓜拿纳树。两个咖啡因的别名：马黛因和瓜拿纳因子就是从这两种植物演化而来。

世界上最主要的咖啡因来源是咖啡豆（咖啡树的种子），同时咖啡豆也是咖啡的原料。咖啡中的咖啡因含量极大程度上依赖于咖啡豆的品种和咖啡的制作方法，甚至同一棵树上的咖啡豆中的咖啡因含量都有很大的区别。