HBV-反义寡核苷酸（ASO）当前全球只有两家在研制中，分别是葛兰素史克和临床阶段生物制药公司（Aligos Therapeutics）。虽然，今年三月末Aligos已宣布终止乙肝病毒反义寡核酸 ALG-020572（1期多次报告ALT突然升高，提示肝毒性），该公司继续在动物实验中，探索HBV ASOs分子。

乙肝新型反义寡核酸，通过AAV-HBV模型，验证三种结构新颖ASOs

在2022年欧肝会上（EASL2022），研究人员发表了一项题为：结合新型ASO化学物质后，显著提高了AAV-HBV小鼠模型中HBV ASOs的效力和持久性。应用专有化学方法开发了同类最佳的HBV ASOs，即 ALG-020572 和 ALG-020576，它们都具有独特的 N-乙酰半乳糖胺 4 (GalNac4) 偶联物。

这些ASOs，分别针对小 HBsAg 和 HBx蛋白的开放阅读框。这两种ASOs均含有下一代螺环丙基桥接核酸 (scp BNA) 和核碱基修饰单体，可降低肝毒性，同时在AAV-HBV小鼠模型中保持疗效。

在这项研究中，研究人员进一步探索了 ALG-020572 和 ALG-020576序列中的其他 BNAs，例如胍桥核酸 (GuNA) 和其他专有的 BNAs，并进一步证明了它们可以在体外和体内改善并提高活性。实验方法如下：

研究人员在 MerMade 12 与 MerMade 48 合成器上合成了具有LNA和第三代BNA化学成分的ASOs。采用 HBsAg 释放法，在 HepG2.2.15 细胞或HBV感染原代人肝细胞（PHH）中进行体外筛选ASOs。使用AAV-HBV小鼠模型，通过分析小鼠的血浆 HBsAg 和 ALT 以测试 GalNAc-ASOs 的疗效和对肝脏的毒性。

结果表明，发现阶段的 ALG-021682 和 ALG-021639 是和 ALG-020572 定位相同位点的 GalNAc 4 偶联ASOs。ALG-021682包含GuNA，而 ALG-021639 包含一个新型第三代BNA。在 HepG2.2.15 实验中，未偶联的 ALG-021682 的 EC50 比未偶联的 ALG-020572 低 5倍。

在HBV感染PHH中，未缀合的 ALG-021639 比未缀合的 ALG-020572效力高 5 倍。在AAV-HBV小鼠模型中，在单次皮下给药 5mg/kg ALG-021682 和ALG-021639时，实现的乙肝表面抗原最低值要比 ALG-020572类似物还低 2 倍。没有一个ASO，显示ALT升高。

最后，发现阶段的ALG-021618 是 ALG-020576衍生的一种结构新颖ASO。由于无法被 HepG2.2.15 细胞代谢处理，它在体外是无活性的。然而，在第0天、第3天和第7天重复给药 3X10 mg/kg的 AAV-HBV 小鼠模型中，ALG-021618 实现的 HBsAg 最低值为 - 1.8 log10 IU/ml vs. ALG-020576 -1.2 log10 IU/ml。第60天，以 ALG-020576给药的动物的 HBsAg 恢复到基线水平，但 以 ALG-021618给药的动物，仍将 HBsAg 抑制 1 log10 IU/ml。

综上所述，研究人员给出结论是：GuNA 和其他新型BNAs，改善了先导ASO ALG-020572的体外和体内活性。经过新修饰后的ALG-020576，显著提高了对 HBsAg敲低的体内深度和持久性。结合这些化学物质的进一步研究正在进行中。

小番健康结语：随着GSK836第2期中期积极数据公布，我们都想更多地了解反义寡核酸（ASO）。Aligos是全球另一家正在深入研究这一领域的制药公司，本研究想要介绍的进展其实很简单，即虽然HBV-ASOs-ALG-020572因对肝脏毒性在1期终止了，但在572的基础上，继续在动物实验中探索更多新型ASOs分子，比如本研究中的 ALG-021682、 ALG-021639和 ALG-021618；

它们在AAV-HBV小鼠模型实验中显示，在抗病毒效力方向，特别是对乙肝表面抗原调降作用方面明显高于已经终止的ALG-020572。同时，以上三种早期阶段的反义寡核苷酸，也没有一种导致转氨酶升高，即未见肝毒性。而 ALG-021682与ALG-021639是基于ALG-020572基础上研发的，ALG-021618是基于ALG-020576基础上开发的反义寡核酸。