数据还对不上?AnnexinV&CCK-8关联性分析

聚焦细胞检测 2024-11-04 09:10:03
在前期的笔记《数据对不上?细胞周期&CCK-8结果关联性分析》中,小E老师给大家讲解了CCK-8与细胞周期之间的神秘联系,很快就有好奇宝宝来问了:我的实验结果还是有问题啊,周期的结果是和CCK-8对上了,但是Annexin V凋亡结果还是和CCK-8对不上号😕。 别急别急,深呼吸😌,本次课堂小E老师👩‍🏫就带大家一起来揭开Annexin V与CCK-8之间的不解之缘。 解题思路嘛,还是我们熟悉的套路👣,要揭开这层神秘面纱,就得先深入地了解他们的真实检测指标🔬。 🔍 【CCK-8】 CCK-8检测的是样本中的脱氢酶总活力,只要待测样本中的脱氢酶活力改变了,CCK-8检测的OD就会随之改变。同时,因为CCK-8检测结果最终反映为OD值,其他原因带来的颜色变化也可能导致OD值改变。 🔍 【Annexin V】 Annexin V检测的是样本中暴露在细胞表面的磷酯酰丝氨酸(PS)。通常情况下,与Annexin V搭配使用的核染料,能够进入到细胞膜通透性改变的细胞内部,与其中的核酸进行结合。 根据实验原理可知,只要细胞膜表面有磷酯酰丝氨酸(PS),就能和Annexin V结合;只要核染料能进入细胞内,同时细胞内有核,即可被核染料结合。据此,在分析CCK-8与Annexin V结果关联性之前,一定要先排除Annexin V检测中出现的各种异常情况: 1. 正常血小板的外表面即含有大量的磷酯酰丝氨酸(PS),因此无法用Annexin V进行血小板的凋亡检测; 2. 哺乳动物成熟的红细胞及血小板均没有细胞核,因此核染料无法与此类细胞进行结合; 3. 某些药物可能会破坏磷酯酰丝氨酸(PS)或DNA,从而导致检测试剂无法正确结合; 4. 贴壁细胞发生凋亡时,晚凋细胞会漂浮起来,未收集上清可能导致晚凋群体缺失; 5. 细胞接种密度过高,从而导致细胞被“挤死”。 6. 更多Annexin V样本制备及上机检测异常排除相关内容,请移步《从入门到精通:Annexin V凋亡实验攻略🔥》。 解决完以上异常情况后,就可以来正式分析CCK-8与Annexin V的结果关联性了。→P4

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