🧬 设计目标基因：在NCBI查找目的基因的cds区，确定目标基因序列。设计合适的限制酶切割位点和引物，以便将目标基因插入到质粒载体中。 🔍 准备质粒载体：根据物种和需求选择一个合适的质粒载体，可以查询云舟生物的VectorBuilder获得介绍。使用两种不同的限制酶对质粒载体进行双酶切，产生互补末端。酶切后的质粒通过凝胶电泳分离并纯化。 📐 目标基因的克隆：目标基因通过PCR扩增，并使用限制酶切割，产生与质粒载体相匹配的末端。 🔗 连接反应：纯化后的质粒和目标基因混合，使用DNA连接酶进行连接，形成重组质粒。 🌱 转化宿主细胞并筛选阳性克隆：重组质粒转化到大肠杆菌等宿主细胞中，利用抗生素抗性基因筛选转化成功的宿主细胞，并进行菌落PCR验证。 🔎 验证和序列测定：对阳性克隆进行酶切验证和序列测定，确保目标基因正确插入。验证后的质粒载体导入目标宿主细胞，进行目标基因表达和表达产物功能特性分析。 🧬云舟生物VectorBuilder提供定制化基因载体构建服务，能够帮助大家快速设计和构建所需的表达载体，还提供完整的重组病毒生产服务，保证病毒滴度和效率。 云舟生物的DNA编辑软件VectorBee也很好用，界面设计直观易用，还包括DNA序列翻译、引物设计、序列比对工具、GC含量和CpG岛可视化等功能，超级方便！要比Snapgene更加好用！