这都拿不下你 "🔬学姐秘籍大公开：Trizol法高效提取RNA的独家经验！" 📚 高效Trizol提取RNA的专业指南📣 🌟一、实验前准备 🧩1. 材料准备：确保所有使用的耗材（如离心管、枪头等）均为无RNA酶污染，可通过紫外照射或专用去RNA酶处理液进行处理。 🧩2. 试剂预冷：将Trizol试剂及后续所需的氯仿、异丙醇等试剂置于冰上预冷，以减少RNA降解的风险。 🧩3. 样品处理：对于细胞或组织样品，应迅速进行裂解操作，避免RNA因内源性酶的作用而降解。 🌟二、Trizol裂解与相分离 🧩1. 适量裂解：根据样品量加入适量Trizol试剂，确保样品充分裂解。对于细胞样品，可直接加入Trizol后吹打混匀；对于组织样品，则需先进行研磨或匀浆处理。 🧩2. 相分离：裂解后，加入氯仿（通常为Trizol体积的1/5），剧烈振荡混匀后静置，使溶液分为三层（上层为水相，含RNA；中间层为蛋白质；下层为有机相）。此步骤需严格控制时间，避免过度振荡导致基因组DNA污染。 🌟三、RNA沉淀与洗涤 🧩1. RNA沉淀：小心吸取上层水相至新管中，避免触及中间层。加入等体积异丙醇，轻轻混匀后静置沉淀RNA。 🧩2. 洗涤RNA：沉淀形成后，弃去上清，用75%乙醇（DEPC水配制）洗涤RNA沉淀两次，以去除残留的盐、Trizol及异丙醇等杂质。 🌟四、RNA溶解与保存 ⚠️1. RNA溶解：将洗涤后的RNA沉淀自然风干至半透明状，避免过度干燥导致RNA难以溶解。加入适量无RNA酶的水或TE缓冲液溶解RNA。 ⚠️2. 质量检测：通过分光光度计测定RNA的浓度和纯度（A260/A280比值应接近2.0），同时进行电泳检测以评估RNA的完整性。 ⚠️3. 妥善保存：将提取的RNA分装后置于-80℃冰箱保存，避免反复冻融。