细胞传代是为了把长满了的细胞分到新的容器里面让它们继续生长或者用来进行不同处理，是细胞培养中的一项基本技术，关系着后续的处理和样品的提取。今天师兄来讲一下细胞培养的步骤和注意事项 🛠 准备阶段：确保所有材料和设备都已在无菌条件下准备好，包括细胞培养箱、培养皿或培养瓶、移液器、无菌盒装枪头或灭过菌的枪头、胰蛋白酶、培养基、PBS等。在传代前，弃去旧培养基，使用PBS洗一遍细胞，避免培养基中的蛋白影响后面消化的步骤。 🔪 胰蛋白酶处理：向培养瓶中加入胰蛋白酶，轻轻摇晃培养瓶或培养皿使其均匀覆盖细胞层，难消化的细胞可以在培养箱中静置一段时间，肉眼观察细胞是否脱落，或者镜下观察细胞是否变圆。当细胞大部分脱落后，使用培养基终止胰蛋白酶的消化作用，此时可以进行细胞计数。 🔁 离心与接种：800-1000rpm离心3-5min。离心时可以准备新的培养皿。完全弃去离心管里的液体，加入新的培养基，轻柔吹打制备细胞悬液，加入新的培养瓶或培养，轻轻摇匀。 📝 记录与观察：将细胞放回细胞培养箱，注意37℃和5% CO2。详细记录传代时间、代次、接种密度等信息，并每天固定时间观察细胞生长情况。 ⚠注意事项 🧴 无菌操作：整个传代过程都应在无菌条件下进行，使用生物安全柜，并注意无菌技术。在超净工作台内进行操作时，应合理布局管理设备和耗材的摆放位置，手不要越过打开的瓶口或者皿的上方，用过的液体及时盖上盖子，防止造成操作引发的污染。 ⏳ 消化时间根据细胞特性有所不同，需要仔细观察细胞解离情况来确定消化终止时机。过早终止，细胞仍然紧紧贴壁，把细胞强行吹下来会造成机械损伤。过晚终止，胰酶也会损伤细胞。 📊 使用细胞计数仪器确定细胞总数和活细胞百分比，或者根据培养容器底面积换算，以计算接种密度。太稀或太密均不利于细胞生长。当不需要使用细胞或细胞量足够时，可以将细胞冻存起来，供以后实验使用。 📝长时间伏案工作久了真的很疲惫，加上压力大睡眠不好整个人看上去黑黑的。S.Leovay水素与水结合产生大量氢，进入细胞核线粒体，调节线粒体自噬进而激活线粒体防御机制，清除和抑制活性氧自由基；抗氧化，助眠~小颗粒，好吞服，每天2粒，温水送服