不懂就问有问必答 划痕实验🧾 一：实验试剂与耗材 倒置显微镜 CO2培养箱 6孔板 marker笔 直尺 无血清培养基 完全培养基 PBS 离心管 胰酶 15ml离心管 培养皿 二：步骤 1️⃣：培养板划线标记 使用marker笔在6孔板背后，每孔至少3条线每隔0.5-1cm划一道横穿过孔 ，用直尺均匀的画 2️⃣：细胞铺板 胰酶消化细胞，制备细胞悬液。细胞计数后铺板，保证每组细胞铺 板密度一致，一般在孔内接种约5-10x105个细胞，对数生长期消化后重悬细胞悬液显微镜下计数，摇皿画8字摇匀法/十字摇匀法 细胞接种密度原则为过夜100%融合（具体接种数量可根据细胞生长快慢调整，保证过过液后细胞能够铺满即可，切记一定要铺匀❗️❗️） 3️⃣：细胞划线 第二天用移液枪枪头（200ul），与细胞平面垂直，marker笔印记在细胞层上进行划痕，使划痕与标记相交 （注意不瞳孔之间最好使用同一个枪头，保持力度一致，尽量一次性划完，这样可减少划痕距离的误差） 4️⃣：去除划下细胞 划痕完成后—吸去旧培养基—无菌PBS洗细胞2-3次，洗去划下的细胞—使留下的间隙肉眼即清晰可见—加入新鲜无血清或低血清 （