冻存的细胞复苏不活？这些细节应该从冻存的时候就注意！ 1⃣ 使用适当的冷冻保护剂 ：常用的冷冻保护剂是二甲基亚砜（DMSO）、它们可以减少冰晶的形成，保护细胞免受渗透压变化的影响。 2⃣ 控制冷冻速率 ：慢冻快融，尽量使用梯度降温盒，或者手动梯度降温。细胞在冷冻过程中应以-1°C至-2°C/分钟的速率降温至-80°C，然后转移到液氮中进行长期保存。 3⃣ 使用合适的容器 ：冻存细胞时，应使用适合冷冻的容器，如冻存管，它们可以承受低温而不破裂。 4⃣ 避免细胞数量过多或过少 ：在冻存前，应避免细胞过度浓缩，以免增加细胞间的机械压力。每个冻存管中的细胞数量也不宜过少，会影响细胞复苏时的生长。通常根据细胞类型和冻存后的使用目的来确定，一般1ml的冻存液中的细胞刚好能够复苏到6cm皿或者T25培养瓶中比较合适。 5⃣ 记录详细信息 ：在冻存管上清楚地标记细胞类型、冻存日期、细胞密度等信息，以便日后追踪和使用。 6⃣ 避免反复冻融 ：细胞在冻存和复苏过程中应尽量避免反复冻融，因为这会大大降低细胞的存活率。 7⃣ 复苏时快速升温 ：在细胞复苏时，应迅速将冻存管从液氮中取出，并在37°C水浴中快速升温，以减少细胞在冰点附近的停留时间。 8⃣ 使用适当的复苏介质 ：复苏细胞时，应使用与冻存时相同或相似的培养基。 9⃣ 彻底去除冻存液 ：复苏时用培养基稀释冻存液，离心后彻底去除冻存液再用培养基重悬后培养。 现在冻存液有试用活动哦，记得戳