[偷笑R]理想情况下,我们的课题中会从不同角度、用不同实验论证同一件事。但是,实验中的影响因素非常多,有时候得不到理想的结果,不同实验的趋势不一致,就让人非常困惑。出现这种问题也不用着急,让我们来仔细分析原因。
1⃣本次结果是否可靠?是否进行了重复实验?
每次实验是一次抽样的过程,可能会出现各种误差。这次实验中有没有什么可能导致误差的地方?检测前样品没有充分混匀、WB曝光的时候曝光液没有淋匀都可能造成趋势的差异。重复是科研中很折磨人的一件事,但是也是必不可少的。
2⃣从中心法则看待结果不一致的原因
基因通过转录产生mRNA,mRNA翻译成为蛋白质,蛋白质执行生物功能。mRNA的水平和蛋白质的水平一般应该是一致的。但是如果不一致,也可以尝试分析原因:
📌延迟效应:蛋白质合成通常需要一定的时间,而mRNA的表达可以更快地响应刺激。因此,在某些情况下,mRNA的变化可能会比蛋白质水平的变化更早或更晚出现,导致两者之间的不一致。
📌mRNA的可变剪接:转录后的mRNA可能产生多种不同的剪接体,qPCR的目标的仅仅是mRNA上的一段。有可能检测到的mRNA水平降低,但是别的剪切体增加,导致了蛋白水平的升高。
📌负反馈:细胞中存在平衡。蛋白水平高时,转录可能会抑制,mRNA因负反馈调节而下降,反之亦然。
📌蛋白翻译的调节:有可能蛋白mRNA水平不变,但是翻译大大增强,蛋白量就会升高。反之,如果存在影响翻译的因素,也会导致mRNA高而蛋白低。
📌蛋白翻译后的稳定性:蛋白翻译后修饰可能会影响蛋白的稳定性,例如泛素化的增加会促进蛋白通过蛋白酶体途径降解,蛋白水平下降。
🌟总之,在不同实验结果不一致时,牢记中心法则,时刻考虑最终发挥生物功能是蛋白质我,尝试分析原因,让我们的机制研究更加严谨而丰富。
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师兄,请问为什么做双荧光素酶报告基因实验要用293T细胞,如果只做293T细胞不做目前实验的细胞能说明问题吗?因为想研究转录因子,但是目前的实验细胞很难转染
师兄,谁问我跑qPCR的时候,同样的样本,第一次逆转录后去跑,内参基因的Cp值都在14-16左右,挺好的。但是放在负二十冷冻后,再跑q的时候,内参cop值全到二十多了,请问这是什么原因啊
同款神经酸也!但是我是吃了一段时间后才意识到有可能是神经酸起作用了,感觉还可以