师兄带你彻底搞懂铁死亡检测关键指标

做科研的小飞博士 2024-07-12 00:12:08
[赞R]年年说铁死亡过气,年年铁死亡还是大量出现在文章和各类标书中。师兄今天就来稍微讲一下什么是铁死亡,以及常见的检测指标(表型)。顾名思义,铁死亡是一种铁依赖性的细胞程序性死亡,依赖于铁介导的氧化损伤,涉及多个通路。由于种种原因,在亚铁离子的参与下,细胞内的多不饱和脂肪酸(PL-OH)被过氧化,导致线粒体收缩、线粒体膜和细胞膜破裂,最终导致细胞死亡。 [太阳R]铁死亡的常见指标如下: 1⃣️细胞活性检测:铁死亡会抑制细胞活力,我们可以通过MTT、CCK-8等实验来评估这种影响。 2⃣️脂质过氧化物检测:铁死亡的一个显著特征是脂质过氧化产物的积聚,可以通过测量丙二醛(MDA)和脂质过氧化产物(LPO)的水平来进行评估。 3⃣️二价铁离子水平:细胞内亚铁离子(Fe²⁺)的积聚是铁死亡的一个标志性特征,可以通过比色法或使用如Phen Green SK这样的荧光探针来检测。 4⃣️活性氧(ROS)水平:在铁死亡过程中,活性氧的水平通常会升高,我们可以使用DCFH-DA或H2DCFDA等荧光探针来监测这种变化。 5️⃣线粒体变化:线粒体在铁死亡中起着关键作用,其形态的变化(如萎缩、致密化)和膜电位(MMP)的降低可以通过JC-1染料或电子显微镜观察来评估。 6️⃣谷胱甘肽代谢:在铁死亡过程中,谷胱甘肽(GSH)的含量往往会降低,我们可以通过比色法或高效液相色谱(HPLC)来检测GSH、总谷胱甘肽(T-GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷氨酸(GLU)和半胱氨酸(Cys)的水平。 7️⃣铁死亡相关基因及蛋白表达:铁死亡相关的基因和蛋白,如ACSL4、LPCAT3、转铁蛋白受体1(TfR1)、SLC7A11、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁蛋白重链1(FTH1)的表达变化,可以通过实时定量PCR(RT-qPCR)、Western blot或免疫组化等技术来检测。
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