蛋白质免疫印迹（Western Blot, WB）是一种检测特定蛋白表达量的实验。以下是简要的实验步骤（详细步骤和操作见图）： 1. 配置SDS-PAGE胶 10%分离胶：混合ddH2O 7.9ml、30%丙烯酰胺6.7ml、1.5M Tris-HCl pH 8.8 5.0ml、10% SDS 200μl、10% 过硫酸铵200μl和四乙基乙二胺8μl，倒入玻璃板中，静置凝固。 浓缩胶：混合ddH2O 4.1ml、30%丙烯酰胺1.0ml、1.0M Tris-HCl pH 6.8 0.75ml、10% SDS 60μl、10% 过硫酸铵60μl和四乙基乙二胺6μl，倒入已凝固的分离胶上，插入梳子。 2. 蛋白质电泳SDS-PAGE 电泳液：按Tris 3.03g、甘氨酸18.77g、SDS 1g和ddH2O 1000mL比例配置。 上样：拔出梳子，向孔中加入蛋白样品或marker。 电泳：恒压80V启动，蛋白进入分离胶后调至120V，电泳至适当位置停止，以自己需要的最小蛋白没有跑到底为准。 3. 湿转法转膜 转膜液：1×转膜液由100ml 10×转膜液(Tris 3.03g、甘氨酸18.77g和ddH2O 1000mL)、200ml无水甲醇和700ml ddH2O配置。 激活PVDF膜：在醇类中浸泡至半透明。 转膜：将凝胶转移到三明治夹上，覆盖激活的PVDF膜，冰上300mA恒流转膜120分钟（具体时间根据分子量大小调整）。 4. 封闭及抗体孵育 TBST：由10×TBS（Tris 24.23g，NaCl 80.06g，ddH2O 1000ml）、去离子水、吐温和适量盐酸配置，调节至pH约7.4。 封闭：PVDF膜浸泡于含5%BSA或脱脂奶粉的TBST中1小时。 一抗孵育：TBST洗涤后，浸泡于一抗中，4℃过夜。 二抗孵育：TBST洗涤，配置含5%BSA或脱脂奶的TBST二抗，室温孵育1小时，TBST洗涤。 5. 化学发光检测 化学发光液：A液和B液按1:1混合，均匀淋于膜表面。 曝光：将膜放置于化学发光仪中，根据需要调整曝光时间。