太长不看版： 🔬 现在常用的就是PCR和RT-qPCR。 🧬 PCR：目的是扩增目的DNA片段，得到DNA产物。后续一般会跑琼脂糖凝胶电泳进行纯化，或者进行酶切酶连等分子生物学实验。 📊 RT-qPCR：目的是对某个mRNA进行定量测定。RT指的是Reverse Transcription，先把细胞里提的RNA逆转录为cDNA。q指的是Quantitative，指在PCR的基础上加入荧光标记探针或染料，实时监测每个循环中扩增的DNA量。跑完以后一般把样品直接扔掉，分析数据计算目的基因的表达量。 注：RT除了reverse transcription还可以是real-time. q只代表quantitative，绝大多数就是指荧光定量real-time。总之我们常说的跑qPCR指的是又有逆转录步骤又有实时荧光定量的RT-qPCR。 下面是详细介绍： 🧬 PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应） • 目的：扩增特定的DNA序列。 • 原理：利用DNA聚合酶在特定温度循环下（通常是95°C变性、55°C退火、72°C延伸）复制目标DNA片段。 • 应用：基因克隆、DNA指纹图谱、病原体检测等。 📈 qPCR（Quantitative Polymerase Chain Reaction，定量聚合酶链式反应） • 目的：定量分析DNA序列的拷贝数。 • 原理：在PCR基础上加入荧光标记探针或染料，实时监测每个循环中扩增的DNA量。 • 技术：使用SYBR Green染料或TaqMan探针等。 • 应用：基因表达分析、病原体定量、遗传突变检测等。 🧪 RT-PCR（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction，逆转录聚合酶链式反应） • 目的：从RNA模板扩增cDNA。 • 原理：首先使用逆转录酶将RNA转录为cDNA，然后利用DNA聚合酶进行PCR扩增。 • 应用：检测特定mRNA的表达、基因表达分析等。 📊 RT-qPCR（Reverse Transcription Quantitative Polymerase Chain Reaction，逆转录定量聚合酶链式反应） • 目的：定量分析RNA序列的表达水平。 • 原理：结合了RT-PCR和qPCR的技术，先逆转录为cDNA，然后进行实时定量PCR。 • 技术：使用SYBR Green染料或TaqMan探针等，实时监测cDNA的扩增。 • 应用：基因表达的定量分析、miRNA表达分析、病原体RNA定量等。 这些技术各有特点，可以根据实验目的和需求选择合适的方法。PCR和qPCR通常用于DNA的分析，而RT-PCR和RT-qPCR则用于RNA的分析。现在常用的主要就是PCR和RT-qPCR而已了。