乙肝病毒（HBV）共价闭合环状DNA（cccDNA）在HBV持续感染中起着重要作用。虽然已有有效抗病毒药物核苷（酸）类似物（NAs），但慢性乙肝（CHB）仍需要长期使用NAs，更多地了解cccDNA，靶向cccDNA库的新型化合物开发，是根除持久性cccDNA的潜在方向。

乙肝沉默cccDNA转录药研，浅谈新应用前景，以及核苷类药物格局

ARC-520，是一种胆固醇结合的siRNA分子，由箭头制药公司（Arrowhead Pharmaceutical）研发，目前已终止。在早期HBV转基因小鼠动物实验中，转染的 ARC-520显著调降了HBVDNA和RNA的水平。在其2a期临床试验中，具有高耐受性，并在慢乙肝受试者中显示乙肝表面抗原（HBsAg）显著剂量依赖性下降。这是全球早期开发的一种沉默RNA（siRNA）。

表观遗传沉默疗法，是全球另一个设计沉默cccDNA转录的潜在方法，即对cccDNA的表观遗传沉默，可以持久地阻止乙肝病毒转录，从而在功能性治愈HBV的药研方面带来机遇。其中，全球以干扰素为代表，已经用于抑制HBV cccDNA的靶点。干扰素通过募集 hSirt1 和组蛋白去乙酰化酶 HDAC1 并降低 cccDNA结合的蛋白乙酰化来抑制 HBV cccDNA 转录。

运用基因编辑技术来沉默cccDNA的表达。基因剪刀全球已有三种技术，锌指核酸酶 (ZFNs)、转录激活因子样核酸内切酶 (TALENs) 和 RNA 指导的成簇规则间隔短回文重复序列 CRISPR/Cas 系统。

ZFN是一种定制的 DNA 核酸内切酶，用于在特定目标位点切割双链DNA，随后通过改变切割位点序列来修复它。ZFN的机制与另一种基因剪刀相似，并在临床前试验模型中证明，可长期调降HBVDNA的水平。同时，将基因沉默疗法与基因编辑相结合的设计，也正用于治疗HBV感染的早期研究中。

核苷类药物，虽然可以快速调降HBVDNA，但在停用核苷类或免疫抑制状态下，HBV复制依旧可能恢复，这也说明cccDNA是会长期存在的。作为稳定的HBV转录模板，完全灭活cccDNA是全球研究热门课题，但上述新技术的基础研究，估计都还需要很长时间。在细胞培养系统中如，三种基因编辑技术应用于HBV治愈，已有研究至靶向与切割cccDNA，但还需要克服脱靶、体内递送途径等问题。

以CRISPR/Cas9系统为例，它是近几年来科研人员最新发现的一种程序化基因组，可通过操纵特定于目标序列的引导RNA来特异性编辑DNA序列。相比于ZFNs和TALENs，CRISPR/Cas9有着更低开发成本的优势，而受到科研人员关注。已有研究表明，CRISPR/Cas9靶向与切割cccDNA，在体外和体内模型中，可抑制乙肝病毒复制与乙肝表面抗原和乙肝核心相关抗原的合成。

小番健康结语：随着全球针对HBV生命周期更多步骤开发乙肝创新药，药研圈内也有人提出，以核苷类药物比重较高的乙肝药物市场格局是否发生改变？当然，虽然已有许多新技术应用潜在治愈HBV的临床前或已处于临床开发，但相当多候选药物均为联合核苷类的组合疗法，其中不乏siRNA+NA，siRNA一种新型直接作用抗病毒药物研究方向，siRNA联合NA的组合策略，已被证明能够显著调降HBsAg。

一些新型免疫疗法，如治疗性乙肝疫苗、抗PD-1/PD-L1抗体也多与NA进行联合使用。因此，从短期看（3-5年），动摇核苷类为主的乙肝药物格局可能性不高。即便现有单一疗法已在强效抑制乙肝表面抗原水平的新型DAA处于2期后半段，进入到3期研究，也还需要数年时间，中间都有较多不确定性。